Nuklein turşularının sintezinin prinsipləri

Nuklein turşusunun sintezi bərk fazalı sialik amid trigliserid üsulundan istifadə etməklə həyata keçirilir, bununla da DNT-nin 3′ ucu bərk fazalı substratda hərəkətsizləşdirilir və istənilən DNT fraqmenti sintez olunana qədər 3′-dən 5′-ə qədər nukleotidlər əlavə edilir. .Bu, DNT polimerazının tətbiqi ilə DNT sintezindən fərqlənir.

Birinci bazanın 3′ ucu sintez zamanı CPG üzərində hərəkətsizləşir, növbəti bazanın 5′-OH hissəsi di-p-tolil tritil DMT ilə, əsasdakı amin qrupu benzoik turşusu və 3′ ucu ilə qorunur. -OH daha sonra bir amin fosfat birləşməsi ilə aktivləşdirilir.5 5′-OH 1 əsas və 3′-OH 1 əsas fosfit trigliserid əmələ gətirir, sonra yod ilə fosfat trigliseridinə oksidləşir, ikinci əsasdakı qoruyucu 5′-OH tərəfindən çıxarılır. dixloroasetik turşunun əlavə edilməsi növbəti bazanın əlavə edilməsi ilə DM dövrləri və sintezdən sonra 5′-OH üzərindəki qoruyucu zəif turşu ilə çıxarılır Fraqment qatılaşdırılmış ammonium hidroksid ilə bərk qatrandan ayrılır, qoruyucu əsasdan çıxarılır. konsentratlı ammonium hidroksid ilə qızdırıldıqda ammonium hidroksid çıxarılır, fraqment vakuumda qurudulur və nuklein turşusu maye xromatoqrafiya və ya PAGE ilə təmizlənir.

Oliqo sintezinin mərhələləri

Blokdan çıxarma

The5 son DMT qoruyucu qrup TCA məhlulu əlavə edilərək çıxarılır.

Aktivləşdirmə

Aktiv oliqonukleotid monomerin ara məhsulunu yaratmaq üçün aktivatorun oliqonukleotid monomeri ilə qarışdırılması.

Bağlama

5-terminal hidroksil qrupu qeyri-sabit fosfit trigliserid bağı yaratmaq üçün anti-generativ kondensasiya reaksiyasında aktiv oliqonukleotid ara məhsulu ilə reaksiya verir.

Qapaq 

Bir qapaq agentinin əlavə edilməsi kondensasiya reaksiyasında iştirak etməyən artıq hidroksil qrupları ilə asetilləşmə qapaq reaksiyasını həyata keçirir.

Oksidləşmə 

Tərkibində su olan yod məhlulunun əlavə edilməsi stabil fosfor turşusu trigliserid bağlarını yaratmaq üçün oksidləşmə yolu ilə qeyri-sabit fosfit bağları ilə reaksiya verir.

Siyanoetil parçalanması

Siyanoetil qrupunu fosfat trigliserid bağından çıxarmaq üçün DEA məhlulunun əlavə edilməsi ilə sintezdən sonra nuklein turşusu məhsulu.

Cleaved & Deprotection

Nuklein turşusu fraqmentləri qatılaşdırılmış ammonium hidroksid məhlulu əlavə edilməklə bərk faza daşıyıcısından ayrılır və sonra əsasların hidrogen bağlarından qoruyucu qrupları çıxarmaq üçün qızdırılır.